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FFF02 C5891-50的原理和突出优点概括

发布时间:2022-10-14 点击量:55
   FFF02 C5891-50无缝克隆试剂盒是一种简单、快速、高效的DNA定向克隆技术,该技术突破传统,不依赖内切酶和连接酶,不受限制性内切酶酶切位点的限制,利用同源重组的原理,可将任何DNA片段克隆至任何载体的任何位点。反应及转化时间短,阳性率高。
 
  FFF02 C5891-50的原理可以概括为三步反应:
  1、T5核酸外切酶从DNA片段的5’端切割一条链,产生的单链DNA末端两两配对,形成一个有间隙的环状DNA;
 
  2、DNA聚合酶通过DNA合成填补间隙,产生一个只有缺刻的环状DNA;
 
  3、TaqDNA连接酶通过形成磷酸二酯键修复缺刻,得到一个完整的双链DNA,也就是构建完成的载体。
 
  FFF02 C5891-50的突出优点:
  (1)构建的克隆没有任何额外的碱基序列,因此是真正的"无缝克隆";
 
  (2)可通过一个反应将一个或多个片段快速、定向地插入到载体的任何位置;
 
  (3)待插入的PCR扩增产物无须酶切;
 
  (4)插入片段的大小范围宽,从20bp左右的小片段到10kb左右的大片段都可以成功插入;
 
  (5)可通过PCR扩增获得线性化载体,因此限制性内切酶消化并不是克隆所必须的;
 
  (6)酶催化的重组连接反应非常快速和高效;
 
  (7)只有插入片段和线性化载体的末端才能发生同源重组,可以有效避免非特异性的同源重组。
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